油鏡是顯微鏡中一種特殊的高分辨率物鏡，使用時需要在物鏡前端與樣品蓋玻片之間滴加浸沒油（Immersion Oil），以顯著提升成像分辨率。油鏡利用浸沒油（折射率≈1.515）填充物鏡與蓋玻片之間的空氣間隙（空氣折射率=1.0），避免光線通過不同介質(zhì)（玻璃→空氣→玻璃）時的折射和全反射損失，從而提高數(shù)值孔徑、分辨率及光通量（減少光散射，圖像更明亮清晰），同時還能匹配折射率。

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根據(jù)數(shù)值孔徑（NA）的公式NA = n?sinθ（n為介質(zhì)折射率），油鏡NA可達1.2-1.4（空氣物鏡NA通常≤0.95）。再根據(jù)分辨率公式 d = 0.61λ/NA可知，NA增大后，可分辨更小的結(jié)構(gòu)（如細菌、細胞器）。浸沒油的折射率（~1.515）與玻璃蓋玻片（~1.52）接近，使用時確保光線直線通過可以有效減少像差。

2. 油鏡的標識與結(jié)構(gòu)

物鏡標注：鏡筒上標有 “Oil”、“OIL”或“HI”（Homogeneous Immersion），數(shù)值孔徑（NA）標注為 1.25-1.4（例如：100×/1.25 Oil）。

工作距離極短：油鏡的工作距離（WD）通常僅 0.1-0.2mm，需緊貼蓋玻片，操作時需謹慎避免壓碎樣品。

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3. 浸沒油的類型與選擇

普通浸沒油：標準折射率（n=1.515），適用于常規(guī)觀察。

無熒光浸沒油：熒光顯微鏡專用，避免自發(fā)熒光干擾。

低溫固化油：用于長時間活細胞成像，防止干燥。

使用注意：油鏡使用后需及時用鏡頭紙+乙醇清潔，避免油漬干結(jié)損壞鏡頭，注意不可與水鏡（Water Immersion）或干鏡（Dry Objective）混用。

4. 油鏡的適用場景

高倍顯微觀察如細菌（如革蘭氏染色）、細胞核、染色體、線粒體等亞微米結(jié)構(gòu)（分辨率可達~0.2μm），病理學（如癌細胞鑒定）、微生物學（如真菌孢子觀察）。

熒光顯微鏡：高NA油鏡可收集更多熒光信號，提升信噪比。

倒置顯微鏡中的應(yīng)用：需注意樣品容器底部厚度（如培養(yǎng)皿），普通油鏡可能不兼容，需選擇長工作距離油鏡或校正環(huán)物鏡。

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5. 油鏡使用步驟

1. 調(diào)焦：先用低倍物鏡找到樣品，切換至高倍干鏡（如40×）初步聚焦。

2. 滴油：旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)盤至油鏡位置，在蓋玻片對應(yīng)處滴1滴浸沒油。

3. 浸沒：緩慢升降物鏡，使油鏡前端浸入油中（避免氣泡）。

4. 精細調(diào)焦：使用微調(diào)旋鈕獲取清晰圖像。

5. 清潔：觀察后用鏡頭紙擦拭油鏡和蓋玻片。

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6. 常見問題與解決

圖像模糊：  

原因：油中有氣泡、油量不足或樣品厚度不匹配。  

解決：重新滴油或調(diào)整蓋玻片厚度（標準0.17mm）。

油鏡損壞：  

原因：未清潔導致油干結(jié)或碰撞蓋玻片。  

解決：定期維護，使用后立即清潔。

熒光信號弱：  

原因：使用普通油（含熒光劑）。  

解決：更換無熒光浸沒油。

7. 油鏡 vs 其他物鏡

油鏡通過浸沒油技術(shù)突破光學顯微鏡的衍射極限，是觀察微米/亞微米結(jié)構(gòu)的核心工具，但需嚴格操作和維護。在倒置顯微鏡中需注意樣品容器的兼容性，必要時選擇專用長工作距離油鏡。